Nanoprobes丨EnzMet 用于免疫组织化学 (IHC) 和印迹

艾美捷 Nanoprobes EnzMet 不仅仅用于原位杂交的光学检测。它对于生物芯片上的 DNA的电检测也非常有效，在使用电J阵列对目标 DNA 进行电检测方面，它提供了优于银增强胶体金的改进。现在，在他们最近的生物传感器和生物电子学论文中、Schüler、Fritzsche 和同事证明，该过程可用于丝网印刷电J结构，用于基于芯片的病毒 DNA 电检测（人类 CMV DNA 的 150 bp PCR 产物）。这些电J阵列是在玻璃基板上生产的，从而可以进行额外的光学读出。丝网印刷结构显示出所需的精度，并与应用的生化协议兼容。与标准光刻法生产的芯片基板相比，丝网印刷芯片表现出相同的灵敏度和特异性。

因此，用于电检测的 DNA 芯片电J阵列的丝网印刷为生产具有微结构电J的 DNA 芯片提供了一种有趣且具有成本效益的方法。也可使用Nanoprobes的EnzMet TM HRP 检测试剂盒用于研究应用程序（目录号 6010）。

参考文献：

Schüler T, Asmus T, Fritzsche W, Möller R.: Screen printing as cost-efficient fabrication method for DNA-chips with electrical readout for detection of viral DNA. Biosens. Bioelectr., 24, 2077-2084 (2009).

Abstract (courtesy of Science Direct).

Nanoprobes EnzMet TM也是免疫组织化学 (IHC) 的理想检测和可视化方法，它可用于高度敏感的检测，具有最小的背景和非常高的印迹对比度. 使用高复杂性组织微阵列 (TMA) 测试免疫组织化学应用。使用自动载玻片染色系统 (Ventana Medical Systems) 通过酶金相 (EnzMet) 评估 88 种常见实体瘤；选择靶点来评估 EnzMet 在 TMA 中特异性定位细胞核（雌激素受体）、细胞质（细胞角蛋白）和细胞质膜 (HER2) 中编码抗原的能力。评估的所有三种抗原的染色强度与乳腺肿瘤以及肾癌、结肠癌和前列腺癌相当。

然而，与 DAB 相比，EnzMet IHC 制剂中的染色质量要清晰得多，并且染色沉积物更清晰，显示出更多的点状外观。EnzMet 和传统 IHC 结果完全一致。EnzMet 反应产物密集且清晰，没有明显扩散，并为评估的核、细胞质和细胞膜定位抗原的石蜡切片中的细胞隔间提供了出色的高分辨率分化。在酶金相过程中沉积的元素银的较高密度允许在相对较低的放大倍数下评估核心免疫表型，而无需油浸，从而可以有效地筛选更多组织。此外，信号稳定并提供永久记录。在酶金相过程中沉积的元素银的较高密度允许在相对较低的放大倍数下评估核心免疫表型，而无需油浸，从而可以有效地筛选更多组织。此外，信号稳定并提供永久记录。在酶金相过程中沉积的元素银的较高密度允许在相对较低的放大倍数下评估核心免疫表型，而无需油浸，从而可以有效地筛选更多组织。此外，信号稳定并提供永久记录。

参考文献：

Tubbs R.; Pettay J.; Powell R.; Hicks D. G.; Roche P.; Powell W.; Grogan T., and Hainfeld, J. F.: High-resolution immunophenotyping of subcellular compartments in tissue microarrays by enzyme me

对于免疫组织化学，使用艾美捷 Nanoprobes的EnzMet EnzMet HRP 检测试剂盒用于 IHC/ISH（目录号 6001）。

左图：石蜡包埋的人膀胱肿瘤中上皮细胞角蛋白的免疫过氧化物酶染色：

（a）用 DAB 进行的继发性免疫过氧化物酶；( b ) 使用 EnzMet TM的二级免疫过氧化物酶法（原始放大倍数 x 400）。

右图：使用 ( c ) DAB 和 ( d ) EnzMet TM开发的 HRP 偶联物对带有 his 标签的融合蛋白进行蛋白质印迹检测的比较。

转移后，将膜与抗 His-Tag (6xHis) 单克隆抗体一起孵育，然后进行 BSA 封闭，然后暴露于偶联辣根过氧化物酶 (HRP) 的二抗。然后通过 DAB 检测（图 A）或 EnzMet TM检测（图 B）可视化带有 His 标签的融合蛋白。泳道1和4：0.1 µg 34 kDa his-tagged ATF-1。泳道2和5：0.1 µg 68 kDa his-tagged YY1。泳道3和6：0.1 µg BSA 和 0.1 µg 卵清蛋白

在大多数情况下，以下使用EnzMet TM进行印迹的 EnzMet TM协议可以替代传统的 DAB 开发，而无需进一步修改协议。然而，由于其更高的灵敏度，可能需要对一抗或二抗探针进行更大的稀释，以实现灵敏度和清晰度的最佳组合。已发现 5 倍至 10 倍的额外稀释在免疫组织化学实验中产生良好的结果，并且在这里也可能是合适的。